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化學(xué)發(fā)光試劑的發(fā)表
更新時(shí)間：2016-11-17瀏覽：1316次
化學(xué)發(fā)光試劑科學(xué)理論發(fā)展觀(guān),核心講解.原理：辣根過(guò)氧化酶使試劑中的發(fā)光物（Luminol）氧化并發(fā)光，而試劑中含有增強劑這使得發(fā)光增強了1000倍。在免疫印跡中，將復雜的蛋白混合物經(jīng)SDS-PAGE分離，并轉移到固相膜上（如NC、PVDF）等，用于免疫學(xué)檢測，經(jīng)HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接（標記一抗）或間接（標記二抗）反應。當加入免疫印跡化學(xué)發(fā)光試劑后，Luminol發(fā)生氧化降解，并發(fā)射波長(cháng)為428nm的光，此光可經(jīng)X光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來(lái)。
化學(xué)發(fā)光試劑使用方法,印跡膜制備,按常規方法完成SDS-PAGE和電轉膜操作，適當的封閉非常重要?？梢酝ㄟ^(guò)標記一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交聯(lián)物。仔細地淋洗對于降低背景非常重要，在與HRP交聯(lián)物溫育后，膜片更需仔細洗滌，所有步驟均在室溫下完成。
化學(xué)發(fā)光試劑的配置,在使用前等量混合A液和B液，混合后盡快使用。將膜片置混合液中于室溫下振蕩溫育2分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片。蛋白信號顯現,用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙以吸去過(guò)量試劑。置膜片于二層保鮮膜之間，小心趕盡氣泡。將膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中。于暗室中壓上X光片。根據信號的強弱適當調整曝光時(shí)間，一般為1min或5min，也可選擇不同時(shí)間多次壓片，以達*效果.創(chuàng )造奇跡,更好未來(lái).
