巴氏染色液在細胞染色上應用廣泛,因為細胞中的細胞核是由酸性物質(zhì)組成,它與堿性染料的親和力較強;而細胞漿則相反,它含有堿性物質(zhì)和酸性染料的親和力較大。巴氏染色液利用這一特性對細胞進(jìn)行多色性染色,細胞經(jīng)染色后能清晰地顯示細胞的結構,胞質(zhì)透亮鮮麗,各種顆粒分明,細胞核染色質(zhì)非常清楚,從而較容易發(fā)現異常細胞。通過(guò)巴氏染色可反映出細胞在炎癥刺激下和癌變后的形態(tài)學(xué)變化,對早期發(fā)現和診斷一些病變和腫瘤具有較重要意義。
巴氏染色液染色的注意事項:
1、細胞核著(zhù)色不佳
?。?)細胞核著(zhù)色過(guò)淺:
1)鹽酸分化時(shí)間過(guò)長(cháng)或蘇木素染液時(shí)間過(guò)長(cháng)。需要縮短分化時(shí)間或延長(cháng)堿化時(shí)間;每日加入少量新鮮蘇木素染液或重新配制蘇木素液。
2)在固定之前制片干燥。所以對巴氏染色的制片需要嚴格遵守濕固定的原則。
3)自來(lái)水的PH值偏酸性。使用堿性溶液。
?。?)細胞核著(zhù)色過(guò)深:
1)鹽酸溶液濃度不夠。適當加入幾滴鹽酸以增加濃度。
2)制片用高于95%以上濃度的酒精固定后可以出現染色過(guò)深。應用95%酒精固定。
2、細胞漿著(zhù)色不佳
?。?)如果全片內胞漿都淡染,則需要延長(cháng)染色時(shí)間或更換新液。
?。?)如果胞漿不分色,均為淺紅色。制片在固定前干燥或制片被有大量球菌樣細菌影響胞漿染色。此情況可以適當增加染色時(shí)間能夠部分糾正不分色狀況。
?。?)胞漿染成灰色或紫色,是由于蘇木素染色時(shí)間過(guò)長(cháng)或鹽酸分化不佳。經(jīng)過(guò)褪色后重新蘇木素可以糾正。
?。?)由于標本的不同,同樣配方的EA染液可造成偏藍、偏綠和偏紅,對不同的標本應該使用不同的EA染液。一般認為,EA36和EA50用于婦科標本,而EA65或改良EA用于非婦科標本。
?。?)胞漿不分色的另一重要原因是由于EA染液的PH值不恰當所致。如染色為紅色,可以加少許磷鎢酸溶液糾正;如染色均為藍色或綠色,可以加少許飽和碳酸鋰溶液糾正。對于改良EA染液,每100ml染液加入2ml冰醋酸后染色效果更佳;染液使用更持久。